无酶细胞消化液的特点及使用方法

点击次数：2602 发布时间：2019/4/25 9:57:35

无酶细胞液不含蛋白消化酶，但能使贴壁细胞与培养瓶皿表面有效脱离达到分离细胞的目的。与常规胰蛋白酶消化方法相比，无酶细胞消化液作用温和，不损伤和破坏细胞，不影响细胞生物学特性，是肿瘤细胞在体移植实验的*佳细胞脱壁方法。细胞用无酶消化液脱壁后，可直接进行传代培养或离心收集用于其它实验。由于未使用蛋白酶制剂，因此特别适于收集细胞进行核蛋白和胞浆蛋白制备、Western Blot、免疫共沉淀实验，同时能避免样品蛋白降解，并避免蛋白酶制剂中的RNA酶对RNA的降解。
特点：
<室温孵育10分钟，贴壁细胞即可从瓶皿脱落，温和而有效

<脱壁的细胞可用于连续传代

<培养肿瘤细胞进行在体移植实验的*佳消化方法

<避免蛋白酶过度消化细胞及降解样品蛋白

<制备胞核和胞浆蛋白、进行Western Blot、免疫共沉淀

<避免蛋白酶制剂中污染的RNA酶降解RNA

储存：4oC密封储存2年。可重复高压灭菌。

使用方法：

1. 用PBS洗涤单层培养细胞，尽可能完全去除瓶中液体。

2. 加入适量无酶细胞消化液使其覆盖细胞表面，晃动瓶皿，使所有细胞均充分接触无酶消化液。

3. 室温放置10分钟或适宜时间，偶尔晃动瓶皿，直到细胞完全脱壁。可加入细胞培养基或2-3倍体积PBS缓冲液终止反应。脱壁后可能有成片细胞连在一起的现象，属于正常，如用作肿瘤移植，上述情况的产生可利于肿瘤细胞的生长。37oC时脱壁反应会加速。

4. 500 g 离心5-10分钟，弃上清，收集细胞。

5. 收集的细胞可用于：(1) 胞核胞浆蛋白制备；(2) Western blot；(3) 免疫沉淀实验；(4) DNA-蛋白结合实验；(5) RNA提取； (6) 分瓶传代。