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明胶酶谱分析试剂盒操作要领大揭秘

点击次数:633   发布时间:2019/6/10 13:10:11

 明胶酶谱分析试剂盒操作要领大揭秘

上海信帆生物供应明胶酶谱分析试剂盒,操作简单方便,可以同时检测MMP2和MMP9的活性,操作方法和免疫印迹相类似。

操作要领:

1.制备聚丙烯酰胺时应注意排除气泡。

2.明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和PH值等因素的影响,因此缓冲液配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。

3.用大梳子。

4.孵育液的PHzui好在7.5-7.6,复性的TRITON时间长了会有絮状物,所以实验时尽量使用新鲜配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培养箱中,因为会改变孵育液的PH值,在普通孵箱即可。

6.明胶要4度保存,配好后1周内使用。

7.样本活性低可以延长孵育时间到48小时

MMP检测注意事项:细胞培养基要用无血清培养基;样本裂解时不含EDTA,明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和PH值等因素的影响,因此缓冲液 配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。因为检测蛋白活性,所以应尽量避免蛋白变性,一般都要求冰上操作,电泳也放在冰水里进行的。

附上一张明胶酶谱试剂盒的条带图

 明胶酶谱分析试剂盒操作要领大揭秘

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,其基本原理1和程序是:制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液,可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2MMP-9 酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测,如果小胶加样孔为10~15个,则总计可检测500~750个样品。

原创作者:上海信帆生物科技有限公司

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