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超好用的Tn5 转座酶,欢迎咨询

点击次数:797   发布时间:2019/12/3 10:06:33

超好用的Tn5 转座酶,欢迎咨询

上海信帆生物供应Robust Tn5 转座酶,产品现货供应,大家有需要可以随时咨询!

Robust Tn5 转座酶

Robustnique

体外转基因操作:

Robust Tn5转座酶可以将含有成对识别序列的双链DNA段(如下图所示)随机整合到宿主细胞的基因组中。整合的过程分为两步:

首先,Robust Tn5转座酶同含有选择标记和识别序列的目标基因片段结合,形成转座体Transposome);之后,通过转化的方式将

转座体导入宿主细胞,利用选择标记筛选成功整合目标基因的宿主细胞。

核酸外切酶活性:50 μl反应体系中,20 U本酶与1 μgpUC19质粒于37°C下温育4小时,DNA的电泳条带无明显变化。

RNase活性:50 μl反应体系中,100 U本酶与250 ng大肠杆菌rRNA37°C温育2小时,经琼脂糖电泳检测,被降解的rRNA小于1%

1. Zhou, M., Bhasin, A., and Reznikoff, W. S. (1998) J. Mol. Biol. 276, 913-925.

2. Ason, B., Reznikoff, W. S. (2004) J. Mol. Biol. 335, 1213-1225.

质量控制检测:

参考文献:

应用:

概述:Robust Tn5转座酶是野生型Tn5转座酶的高活性突变体,可以高效的将Tn5转座子插入到目标序列Robust Tn5转座酶识别Tn5

转座子酶序列的内端inside endIE)、外端outside endOE和嵌合端mosaic endME序列,含有ME序列片段的体外转

座效率高(1)Robust Tn5转座酶的插入位点具有很高的随机性(2,因此被广泛的用于体外转基因(外源基因整合到宿主细胞)和二代

测序建库等领域。

来源:含有Robust Tn5转座酶序列的大肠杆菌菌株。

应用:体外转基因(外源基因整合到宿主细胞),二代测序建库。

贮存溶液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25 °C)100 mM NaCl0.1 mM EDTA0.1% Triton X-10050%甘油(V/V)

反应缓冲液:(随酶提供)10x转座反应缓冲液。

单位定义:1单位Robust Tn5转座酶指37°C条件下反应1小时,完全切割1 μg含有识别序列的DNA段所需要的酶量。

重组酶

包装:

浓度:

存储:

25 U

1,000 U/ml

-20°C

该反应体系可根据需要进行放大。

1.2 充分混匀,室温(25 °C )放置30分钟。

1.3 1-4 μl反应产物进行后续的转化实验,反应产物也可放置于-20°C备用。

2 转化

可以使用的转化方法有电转化,化学转化等。转化后利用选择性标记筛选成功整合目标基因的宿主细胞。

1 转座体(Transposome)的构建*

1.1 准备如下反应体系:

成分

目标基因片段(含选择标记和成对识别序列,100 μg/ml)

Robust Tn5转座酶

100%甘油

体积

2 μl

4 μl

2 μl

Robust Tn5 转座酶现货供应,欢迎抢购

超好用的Tn5 转座酶,欢迎咨询

原创作者:上海信帆生物科技有限公司

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