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点击次数:797 发布时间:2019/12/3 10:06:33
超好用的Tn5 转座酶,欢迎咨询
上海信帆生物供应Robust Tn5 转座酶,产品现货供应,大家有需要可以随时咨询!
Robust Tn5 转座酶
Robustnique
体外转基因操作:
Robust Tn5转座酶可以将含有成对识别序列的双链DNA段(如下图所示)随机整合到宿主细胞的基因组中。整合的过程分为两步:
首先,Robust Tn5转座酶同含有选择标记和识别序列的目标基因片段结合,形成转座体(Transposome);之后,通过转化的方式将
转座体导入宿主细胞,利用选择标记筛选成功整合目标基因的宿主细胞。
核酸外切酶活性:50 μl反应体系中,20 U本酶与1 μg的pUC19质粒于37°C下温育4小时,DNA的电泳条带无明显变化。
RNase活性:50 μl反应体系中,100 U本酶与250 ng大肠杆菌rRNA于37°C温育2小时,经琼脂糖电泳检测,被降解的rRNA小于1%。
1. Zhou, M., Bhasin, A., and Reznikoff, W. S. (1998) J. Mol. Biol. 276, 913-925.
2. Ason, B., Reznikoff, W. S. (2004) J. Mol. Biol. 335, 1213-1225.
质量控制检测:
参考文献:
应用:
概述:Robust Tn5转座酶是野生型Tn5转座酶的高活性突变体,可以高效的将Tn5转座子插入到目标序列。Robust Tn5转座酶识别Tn5
转座子酶序列的内端(inside end,IE)、外端(outside end,OE)和嵌合端(mosaic end,ME)序列,含有ME序列片段的体外转
座效率高(1)。Robust Tn5转座酶的插入位点具有很高的随机性(2) ,因此被广泛的用于体外转基因(外源基因整合到宿主细胞)和二代
测序建库等领域。
来源:含有Robust Tn5转座酶序列的大肠杆菌菌株。
应用:体外转基因(外源基因整合到宿主细胞),二代测序建库。
贮存溶液:50 mM Tris-HCl (pH 8.0 @ 25 °C),100 mM NaCl,0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100和50%甘油(V/V)。
反应缓冲液:(随酶提供)10x转座反应缓冲液。
单位定义:1单位Robust Tn5转座酶指37°C条件下反应1小时,完全切割1 μg含有识别序列的DNA段所需要的酶量。
重组酶
包装:
浓度:
存储:
25 U
1,000 U/ml
-20°C
该反应体系可根据需要进行放大。
1.2 充分混匀,室温(25 °C )放置30分钟。
1.3 取1-4 μl反应产物进行后续的转化实验,反应产物也可放置于-20°C备用。
2 转化
可以使用的转化方法有电转化,化学转化等。转化后利用选择性标记筛选成功整合目标基因的宿主细胞。
1 转座体(Transposome)的构建*
1.1 准备如下反应体系:
成分
目标基因片段(含选择标记和成对识别序列,100 μg/ml)
Robust Tn5转座酶
100%甘油
体积
2 μl
4 μl
2 μl
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原创作者:上海信帆生物科技有限公司