人淋巴细胞因子（LPF）elisa试剂盒这样操作事半功倍！

点击次数：4238 发布时间：2020/1/13 14:38:21

人淋巴细胞因子（LPF）elisa试剂盒这样操作事半功倍！

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人淋巴细胞因子（LPF）水平。用纯化的人淋巴细胞因子（LPF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入淋巴细胞因子（LPF），再与HRP标记的淋巴细胞因子（LPF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的淋巴细胞因子（LPF）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人淋巴细胞因子（LPF）浓度。

操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
24ng/L   5 号标准品   150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
12 ng/L   4 号标准品   150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
6 ng/L   3 号标准品   150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
3 ng/L   2 号标准品   150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
1.5ng/L   1 号标准品   150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 2 0 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 2 0 倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

人淋巴细胞因子（LPF）elisa试剂盒这样操作事半功倍！

原创作者：上海信帆生物科技有限公司