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看过来!琼脂糖凝胶CL-4B进行进行预装柱分离的步骤详解

阅读人数:131 发布时间:2020/5/11 17:14:28

        看过来!琼脂糖凝胶CL-4B进行进行预装柱分离的步骤详解


实惠又好用的琼脂糖凝胶CL-4B现货供应,上海信帆生物供应各类琼脂糖,同时供应配套预装柱,操作方法如下:


琼脂糖凝胶
CL-4B

规格:10ml/50ml/100ml/500ml

产品说明

琼脂糖凝胶 CL-4B 是在琼脂糖凝胶 4B 的基础上通过交联使微球的刚性增强,理化性能提高,有利用于工业

生产。该介质用于生物大分子的凝胶层析。本品呈白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。本产品具有很

高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点,非特异性吸附低,回收率高,可用有机溶

剂及 1~2mol/L 的 NaOH 在位清洗,适用于工业规模生产,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多

肽的凝胶色谱纯化。

操作步骤:(仅供参考)

1、装柱

凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满

凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于 60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。

以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。

1)让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

2)选择一根一定直径的柱子,长约 30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的 1.15 倍),清洗掉

20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3的比例)配成匀浆。

3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。

4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉

降,连结好柱子顶端柱头。

5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子,到柱床稳定。

6)好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。

项目

说明

基质

4%交联琼脂糖

排阻极限

6×104~2×10(球蛋白)

形状

球形

粒径

45~165 μm

高流速

30 cm/h*

耐热

pH7 水中 12020min

耐压

0.025 MPa

pH 稳定性

3~13(长时间)2~14(短时间,在位清洗)

化学稳定性

可耐 8mol/L 尿素、6mol/L 盐酸胍;可耐有机溶剂,如乙醇、DMFTHFDMSCH3Cl

丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈

检测条件

层析柱 10mm×300mm *柱床高 15cm25℃,流动相为 0.1mol/LNaCl2、平衡:让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和 pH 不变。

3、上样:

1)样品用缓冲液配制,要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。

2)介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。

3)上样体积约为柱体积的 1~2%,越小分离越好。

4、洗脱:用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

5、再生:一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。

6、在位清洗

1)对于以离子键结合上去的蛋白,可以用 2M Nacl 去除。

2)对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用 1M NaOH 去除。

3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用 4~10 倍柱体积的 70%乙醇或 30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂

的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。

清洗完毕后,用至少 倍缓冲液平衡柱子。

7、去热源

用 0.5M 的氢氧化钠清洗柱子 5~6 小时或用 0.1M 的氢氧化钠 24 小时。或用以下方法步骤去除:

1倍柱体积的 70%乙醇;

2倍柱体积 50mM Tris-HCl pH7.5

3倍柱体积 4M 尿素;

4倍柱体积的 Tris 缓冲液+0.1M NaCl

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

8、 消毒:用 0.5~1M NaOH 室温下洗 8~10 倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。

注意事项

在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入

产品应密封贮存在 4~25℃(保存溶液为 20% 乙醇),通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

用过的柱子贮存在 4℃(20% 乙醇)。

本产品避免与氧化剂接触;避免长时间暴露在空气中。

保质期:年。

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原创作者:上海信帆生物科技有限公司

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