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明胶酶谱试剂盒检测注意事项-上海信帆生物

阅读人数:88 发布时间:2020/6/16 16:43:13

 明胶酶谱试剂盒检测注意事项-上海信帆生物

上海信帆生物供应基质金属蛋白酶MMP2/9明胶酶谱试剂盒,产品备有大量现货,质量稳定,操作方便,欢迎咨询!
注意事项:

1.制备聚丙烯酰胺时应注意排除气泡。

2.明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和PH值等因素的影响,因此缓冲液配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。

3.用大梳子

4.孵育液的PH在7.5-7.6,复性的TRITON时间长了会有絮状物,所以实验时尽量使用新鲜配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培养箱中,因为会改变孵育液的PH值,在普通孵箱即可。

6.组织或者细胞的话可以用PBS,可以用低渗溶液如三分之一或者四分之一的生理盐水按照5倍体积加入后震荡裂解细胞,离心即可,步骤和提蛋白很相似即可,其实重点的步骤主要是采用低渗裂解液进行裂解,组织的话可以匀浆20-30次,然后10000转左右离心,5分钟取上清即可

明胶酶谱试剂盒检测原理:

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于
SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,其基本原理1
和程序是:制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳结束后
取出凝胶与酶反应Buffer 孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,
但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能
同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学
反应缓冲液,可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂
盒可进行50次标准小胶检测,如果小胶加样孔为10~15个,则总计可检测500~750个样品。

 明胶酶谱试剂盒检测注意事项-上海信帆生物

 

原创作者:上海信帆生物科技有限公司

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