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点击次数：4220 发布时间：2020/7/8 9:29:42
黄曲霉毒素B1酶联免疫定量测试盒如何正确使用
上海信帆生物供应高灵敏度黄曲霉-B1测的试剂盒，产品资料稳定，灵敏度高，深受广大用户青睐！
黄曲霉-毒素B1定量测试盒使用说明书
本测试盒利用固相酶联免疫吸附( ELISA)原理,通过抗黄曲霉-毒素B抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合来检测黄曲霉-毒素B1( Aflatoxin B1,AFB)适用于各类食品、原粮及其制品、饲料及相关原料中AFB的定量检测,特点是灵敏度高,特异性好,操作简便,结果易判读。
测试盒组成
1、包被抗体的反应板 96/48/24孔
2、A试剂:样品稀释液 2/1/1瓶
3、B试剂:AFB标准溶液套 (0,0.1,0.25,0.5,1,2ngmL
4、C试剂:酶标抗原 4/2/瓶
5、D试剂:酶标抗原稀释液
6、E试剂:浓缩洗涤液 l瓶
7、F试剂:显色底物液a 1瓶
8、G试剂:显色底物液b 1瓶
9、H试剂:终止液 瓶
10、反应板框架 块
本测试盒用37℃恒温培养箱反应。另有25℃室温反应测
盒供您选择,欢迎咨询。
二、实验准备
1、样品处理:详见“样品处理方法”
2、试剂配制:酶标抗原溶液:每瓶C试剂(酶标抗原)中准确加入1.5mlD试剂(酶标抗原稀释液),充分溶解,2-8℃保存。洗涤工作液:将E试剂(浓缩洗涤液)用去离子水按1:19体积比进行稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水)。60%甲醇一水:取无水甲醇,用去离子水按64体积比例稀释(6份无水甲醇+4份水)。50%甲醇-水:取无水甲醇,用去离子水按1:1体积比例稀释(1份无水甲醇+1份水)。
实验步骤
测定前须知
1.将所需试剂及微孔板取出,放置室温(20~25℃)30min以上,液体试剂使用前均须摇匀。
2.取出所需数量的微孔板,将不用的微孔板放回铝箔袋中,放置于2~8℃冷藏,不可冷冻。
3.配置好的洗涤工作液在使用前需回温。
4. LISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是 ELISA操作中的要点。
5.在所有恒温孵育过程中,微孔板应避光,加盖孵育。
(二)操作步骤:
1.将样本和标准品对应微孔编号,建议每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
2.每孔加入250L左右洗涤液,洗涤液不得溢出,放置40s左右,甩掉洗涤液,在吸水纸上拍干。
3.分别加入B试剂(标准溶液)待测样液50μL到对应的微孔中,加入酶标抗原溶液50μL孔,轻轻震荡混匀,遮盖后37℃恒温。
注意事项
1试剂及样本没有恢复到室温(20-25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3每种试剂使用前均需摇匀。
4反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5不要使用过了有效期的试剂盒;不要混用不同批号试剂盒中的试剂。
6储存条件:试剂盒保存于2~8℃,不能冷冻,将不用的微孔板重新密封。标准物质和无色的显色剂对光敏感,因此要避光保存。
7试剂变质的迹象:显色试剂有任何颜色表明显色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450mm)值小于0.8(A0m<0.8)时,表示试剂可能变质。
8对玻璃器皿和AFB1溶液消毒好用次氯酸钠(5%,vv)溶液浸泡过夜。
主要技术指标及参数
测试盒分三种规格:96孔、48孔、24孔。反应孔可拆卸,可测单份样品,亦可测多份样品,定量测定每次需要6个标准孔,若限量测定只需3个标准孔。
测试盒的主要技术指标及参数:
1、检出浓度:O.1ng/mL;
2、回收率:87%-110%;
交叉反应系数0-0.21
检测范围:01-2ng
5、重复性:条内CV%<10%,条间CV%<15%。
实验室基本配置
1、酶标仪(内置450nm滤光片)
2、50μL微量移液器及配套吸头恒温培养箱0℃-500 冰箱(2℃-8
5、感量0.0g的天平
6、玻璃器皿:三角瓶,烧杯,分液漏斗,蒸发皿,量筒,具塞试管,滴管,移液管等
7、小型粉碎机或碾钵
8、其它:滤纸,吸水纸等
9、离心机
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