明星产品：赭曲霉毒素（OTA）ELISA 检测试剂盒检测超好用
您还在为试剂盒数据检测不准确操心吗，您还在为同样的样本做2次检测，结果天差地别而烦恼吗？上海信帆生物供应的赭曲霉毒素（OTA）ELISA 检测试剂盒，重复性好，检测灵敏度高，为您的实验助力，欢迎大家咨询！
赭曲霉毒素（OTA）ELISA 检测试剂盒说明书
【概要】
赭曲霉毒素 A（OchratoxinA，OTA）是由曲霉菌和青 霉属菌株产生的一种有毒真菌次级代谢产物，广泛存在于谷物及谷物产品、香料和咖啡豆等产品中。赭曲霉毒素 A 具有很强的肝脏和肾脏毒性，并有致畸、致突变和致癌作用， 严重危害人类健康。赭曲霉毒素一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测, 但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。 而使用赭曲霉毒素 ELISA 试剂盒则能够快速而准确的分析样品中赭曲霉残留。
【适用范围】
本试剂盒可定性、定量检测小麦、大米、谷物及其加工 制品和饲料中的赭曲霉毒素。
【试验原理】
赭曲霉毒素检测试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在 酶标板微孔条上预包被赭曲霉毒素抗原，样本中赭曲霉毒素 和此抗原竞争赭曲霉毒素的抗体（抗试剂），同时抗赭曲霉 毒素抗体与酶标二抗（酶标物）结合，经 TMB 底物显色， 样本吸光值其含有的赭曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中赭曲霉毒素的 含量。
【试剂盒组成】
1. 96 孔板×1 块（8 孔*12 条）
2. OTA 标准溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶）
0ng/mL，0.1 ng/mL，0.25 ng/mL，0.5 ng/mL，1 ng/mL
3. OTA 酶标物 2 瓶........................................................12mL
4. OTA 抗试剂 1 瓶..........................................................6mL
5. 底物液 1 瓶...................................................................6mL
6. 显色液 1 瓶...................................................................6mL
7. 终止液 1 瓶...................................................................6mL
8. 浓缩洗涤液 （20×） 1 瓶........................................20mL
9. 样品稀释液 3 瓶................................. .......................60mL
10. 反应板支架..................................................................1 块
注：48 孔型号试剂盒内容物数量、体积略有差别。
【需要而未提供的设备和试剂】
－－－－酶标仪 450nm
－－－－振荡器
－－-粉碎机
－－-天平：感量 0.01g
－－-微量移液器：单道 20L～200L、100L～1000L
－－-甲醇
－－-去离子水
【试剂配制】
洗涤工作液：将浓缩洗涤液用去离子水按 1:19 体积比进行 稀释（1 份浓缩洗涤液+19 份去离子水）。
70%甲醇-水：取无水甲醇，用去离子水按 7:3 体积比例稀 释（7 份无水甲醇＋3 份水）。
【样本前处理步骤】
一、面粉、小麦、大米等（稀释倍数：12.5）
1. 称取 5.0g 粉碎后样品，加入 25mL70%甲醇-水；
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min；
3. 将滤液或上清液用去离子水以 1:1.5 稀释（例：1mL 滤 液+1.5mL 去离子水），充分混匀后即为待测样液；
4. 移取该液 50uL 进行检测。
二、谷物及其加工产品、配合饲料等（稀释倍数：100）
1. 称取 5.0g 粉碎后样品，加入 25mL70%甲醇-水；
2. 充分振荡 15min 后过滤或 4000rpm 离心 5-10min；
3. 将滤液或上清液用样品稀释液以 1:19 稀释（例：0.1mL 滤液+1.9mL 样品稀释液），充分混匀后即为待测样液；
4. 稀释后的待测样液需 pH 值约 7.0 左右，移取该液 50uL 进行检测。
注意：若样品中 OTA 偏高，建议将样品提取液再进一步稀
释后检测。
【检测步骤】
一、测定前应须知：
1. 使用之前将所有试剂和所需板条回温（20~25℃）。
2. 使用之后立即将所有试剂放回 2～8℃。
3. 在 ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一 致性，正确的洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点。
4. 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，可用盖板膜封 住微孔板。
二、操作步骤：
1. 将所需试剂及微孔板取出，放置室温（20~25℃）30min 以上，液体试剂使用前均须摇匀。
2. 取出所需数量的微孔板，将不用的微孔板放回铝箔袋 中，放置于 2~8℃冷藏。不可冷冻。
3. 配置好的洗涤工作液在使用前也需回温。
4. 将样本和标准品对应微孔编号，建议每个样本和标准品 做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5. 每孔加入 250μL 左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置 40s 左右，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗涤一 次。
6. 先加入标准溶液/待测样液 50μL/孔，再加入抗试剂 50μL/孔，遮盖后 37℃恒温培养箱中反应 30min。
7. 甩掉反应液，用洗涤液 250μL/孔充分洗涤 3 次，每次隔 40s，用吸水纸拍干。再加入酶标物 100μL/孔，轻轻 震荡混匀，遮盖后 37℃恒温培养箱中反应 30min。
8. 小心揭开盖板，甩掉反应液，加入洗涤液 250μL/孔充分 洗涤 5 次，每次间隔 40s，用吸水纸拍干。
9. 每孔分别加入底物液和显色液各 50μL，轻轻震荡混匀， 遮盖后 37℃恒温培养箱中显色 15min。
10. 加入终止液 50μL/孔，轻轻震荡混匀，设酶标仪于 450nm 处读取每孔 OD 值。 (若无酶标仪，则不加终止用目测法可进行判定)。
【结果判定】
标准曲线的绘制与计算 用酶标仪测得每孔的光密度值(A)，绘制标准曲线。通 过准曲线，可准确定量样品中 OTA 含量。 标准曲线：横坐标为 OTA 标准浓度的对数，纵坐标为 百分比（即各标准品孔和样品孔光密度值除以 0 ng/mL 标准 品孔光密度值(A0)再乘以 100%所得， 光密度值(标准孔或 样品孔) ／光密度值(A0)×100%=%(纵坐标)）。相应每个样品 的 OTA 浓度可从曲线上获得。欢迎来电索取专门的数据处
理软件进行计算。
备注：试剂盒初筛后，若出现阳性结果，建议用仲裁法进一 步确证。
【注意事项】
1.
试剂及样本没有恢复到室温（20~25℃）会导致所有标 准的 OD 值偏低。
2.
在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标 准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干 后应立即进行下一步操作。
3.
每种试剂使用前均需摇匀。
4.
反应终止液为 2M 硫酸，避免接触皮肤。
5.
不要使用过了有效期的试剂盒；也不要掺杂使用过了 有效期的试剂盒；不要交换使用不同批号试剂盒中的 试剂。
6.
储存条件：试剂盒保存于 2~8℃，不能冷冻，将不用 的微孔板重新真空密封。标准物质和无色的显色剂对 光敏感，因此要避光保存。
7.
试剂变质的迹象：显色试剂有任何颜色表明显色剂变 质，应当弃之。0 标准的吸光度（450/630nm）值小0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8.
对玻璃器皿和 OTA 溶液消毒用次氯酸钠（10%， v/v）溶液浸泡过夜。
【贮藏条件及保存期】
贮藏条件：保存试剂盒于 2～8℃。
保存期：该产品有效期为 6 个月。生产日期见包装盒。
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