人全血单个核细胞分离液使用步骤

点击次数：215 发布时间：2024/4/3 11:17:48

人全血单个核细胞分离液使用步骤

产品说明：

本产品是一种用于分离人外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。外周血中单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和粒细胞密度较大，为 1.090 g/mL 左右，淋巴细胞和单核细胞密度为 1.075~1.090 g/mL，血小板为 1.030~1.035 g/mL。为此利用一种密度介于 1.075～1.092 之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

产品指标：

密度 1.077±0.001g/mL

渗透压 290~350 mOsm/kg H2O

无菌 0.1μm 滤膜过滤。

操作步骤：

1. 取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者 PBS 稀释全血。

2. 在离心管中加入适量分离液（当稀释后血液体积小于 3mL 时，加入 3mL 分离液；大于等于3mL，加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果），将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。）

3. 室温，水平转子 500~1000g，离心 20~30min（血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，*佳的分离条件需摸索，离心转速不

超过 1200g）。

4. 离心后将出现明显的分层：*上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为单个核细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。

5. 小心的吸取白膜层细胞到 15mL 洁净的离心管中， 10mL PBS 或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心 10min。

6. 弃上清，5mL 的 PBS 或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心 10min。

7. 重复步骤6。

8. 弃上清，细胞重悬备用。