本产品仅供科研实验,不得用于医疗或食用。 Von Kossa染色
Kossa’s矿化结节染色法原理是将矿化基质中的磷酸盐(钙)、碳酸盐(钙)转变为磷酸银、碳酸银,然后用日光、紫外线或强还原剂使其还原为黑色的金属银。可用以观察组织中钙的分部和钙含量多少的检测。
钙盐沉积区域呈黑色,细胞核呈蓝色,背景红色
送样运输要求:
1.样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。切勿固定时间过长,切勿冷冻结冰。
2.石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
Von Kossa染色
二、大致染色步骤 仅供参考
1、切片脱蜡至水
2、置于1%硝酸银溶液在紫外光下45分钟
3、蒸馏水漂洗
4、3%硫代硫酸钠处理5分钟
5、流水漂洗
6、复染5分钟
7、乙醇漂洗
8、透明封片
1、石蜡切片
取材:1、组织离体后需及时固定;2、组织标本不宜过大、过厚。
固定:1、固定液:10%福尔马林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量与组织体积比为10:1~20:1;3、固定:适宜的固定时间,主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片经60℃烤片3-5小时后,可于常温或4℃干燥保存。
2、冰冻切片
取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定:样本冰冻切片后,应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然风干,密封后置于-80℃、-20℃保存,尽快用于后续实验。
3、细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块,然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次(根据研究目的,PBS洗涤可选择不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。
5、细胞涂片
细胞涂片常用的固定液有95%酒精(*为常用)、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。
四、注意事项
1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多数抗原保存良好,适用于免疫组织化学。
2、病理实验切片是防脱片,以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片,应告知切片有无防脱处理。
3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。
4、客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片)
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。
7、浸泡在固定液中的组织样本,在运输中容器需密封,防止破碎、渗漏。
更新时间:2023/11/7 12:14:01