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人白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒说明书实验指导

采购热度:1682 发布时间:2013/7/12

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价格:电议 产地:中国大陆

简单介绍:上海信帆生物是国内外专业的酶联免疫技术代理生产厂商, 试剂盒性能稳定,操作方便,灵敏度高!全程提供技术指导,有质量问题,免费包退换,提供免费代测服务,欢迎联系!

详细介绍

【产品中文名称】 人白介素12(IL-12/P40)ELISA 试剂盒
【产品英文名称】 Human Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA kit 
【保存温度】 2-8℃,避光保存
【产品规格】 96T/48T 
【有效期】  6个月 
人白介素12(IL-12/P40)ELISA 试剂盒
操作流程
1. 加入10 μL 校准品、质控品、待测样品到反应板孔内;
2. 加入100 μL酶标抗体工作液到反应板孔内;
3. 室温摇床温育120 min;
4. 洗板6次;
5. 加入1X底物工作液100 μL;
6. 室温温育15 min;
7. 加入100 μL终止液,摇匀约5 s;
8. 用波长325 nm/420 nm的激发/发射光检测
人白介素12(IL-12/P40)ELISA 试剂盒
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。
     有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。
     其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:
     用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。
   吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:
   即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。
   选择OD值而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。
    然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)
    在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。
   有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,
    应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入.
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标签:人白介素12   IL-12/P40   

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