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Bouin´s固定液现货供应-上海信帆生物

阅读次数:69 发布时间:2019/5/13 14:07:25

 Bouin's固定液现货供应-上海信帆生物

Bouin's固定液现货供应,上海信帆生物供应 Bouin's固定液,产品质量稳定,价格优惠,备有大量库存现货。

 Bouin's固定液主要用于活检标本的固定、媒染剂、适用于脂肪较多的组织标本。主要由PA溶液、甲醛、乙酸组成。

免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂,其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此,简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂,以供读者选用。
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3)
试剂:多聚甲醛             40g
0.1mol/L磷酸缓冲液        至1000ml
配制方法:称取40g多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液(Phosphate Buffer以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末完全溶解,通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮,最后补足0.1mol/L的PB于1000ml,充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较长期保存。
2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠
试剂:A液:多聚甲醛      40g
蒸馏水       400ml
B液:Na2HPO4•2H2O   16.88g
蒸馏水       300ml
C液:NaOH        3.86g
蒸馏水       200m
配制方法:A液在500ml的三角烧瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后,将B液倒入C液中,混合后再加入A液,以1N NaOH或1N HCl 将pH调至7.2~7.4,最后,补充蒸馏水至1000ml充分混合,4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究,用于免疫电镜时,加入少量新鲜配制的戊二醛,使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和,适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中 ,4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
3.Bouin's液及改良Bouin's液
试剂:饱和苦味酸
40%甲醛      250ml
冰醋酸       50ml
配制方法:先将饱苦味酸过滤,加入甲醛(有沉淀者禁用),最后加入冰醋酸,混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸在临用前加入 。改良Bouin's液即不加冰醋酸。
该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一,对组织的穿透力较强, 固定较好,结构完整。但因偏酸(pH为3~3.5),对抗原有一定损害,且组织收缩较明显,故不适于组织标本的长期保存。此外,操作时,应避免吸入或与皮肤接触。
4.Zamboni's(Stefanini's)液
试剂:多聚甲醛          20g
饱和苦味酸           150ml
Karasson-Schwlt's PB    至1000ml
配制方法:称取多聚甲醛20g,加入饱和苦味酸150ml,加热至60℃左右,持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后,加Karasson-Schwlt's PB至1000ml充分混合(Karasson –Schwlt's磷酸缓冲液的配制配制方法见后)。
该固定液适于电镜免疫细胞化学,对超微结构的保存较纯甲醛为优,也适于光镜免疫细胞化学研究,为实验室常用固定剂之一。我们在应用中,常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸,以增加其对组织的穿透力和固定效果,保存更多的组织抗原。固定时间为6~18h。
5.PLP液  PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液(Periodate-Lysine-paraform-alde-hyde fixative)
试剂:过碘酸钠
赖氨酸盐酸盐(或盐酸赖氨酸):
多聚甲醛
蒸馏水
配制方法:
(1)贮存液A(0.1mol/L赖氨酸-0.5mol/L Na3PO4,pH7.4):称取赖氨酸盐酸盐1.827g溶于50ml蒸馏水中,得0.2mol/L的赖氨酸盐酸盐溶液,然后加入Na2HPO4至0.1mol/L,将pH调至7.4,补足0.1mol/L的PB至100ml,使赖氨酸浓度也为0.1mol/L,4℃冰箱保存,两周内使用。此溶液的渗透浓度为300 mOs mmol/L/kg。
(2)贮存液B(8%多聚甲醛溶液):称8g多聚甲醛加入100ml蒸馏水中,配成8%多聚甲醛液(方法见前)。过滤后4℃冰箱保存。
(3)临用前,以3份A液与1份B液混合,再加入结晶过碘酸钠(NaIO4),使NaIO4终浓度为2%。由于AB两液混合,pH从约7.5降至6.2,故固定时不需再调pH值。固定时间为6~18h。
该固定剂较适于富含糖类的组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基,通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合,从而与糖形成交联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成,抗原决定簇位于蛋白部分,故该固定剂有选择性地使糖类固定,这样既稳定了抗原,又不影响其在组织中的位置关系。Mclean和Nakane等认为,最佳的混合是:含0.01mol/L的过碘酸盐、0.075mol/L的赖氨酸、2%的多聚甲醛及0.037mol/L的磷酸缓冲液。
6.Karnovsky's液(pH7.3)
试剂:多聚甲醛   30g
25%戊二醛    80ml
0.1mol/L PB   至1000ml
配制方法:先将多聚甲醛溶于0.1mol/L PB中,再加入戊二醛,最后加0.1mol/L的PB至1000ml,混匀。
该固定剂适于电镜免疫细胞化学,用该固定液在4℃短时固定,比在较低浓度的戊二醛中长时间固定能更好地保存组织的抗原性和细微结构。固定时先灌注固定,接着浸泡固定10~30min,用缓冲液漂洗后即可树酯包埋或经蔗糖溶液后用于恒冷切片。
7.0.4% 对苯醌 (Parabenzoqui)
试剂:对苯醌       4.0g
0.01mol/L PBS   1 000ml
配制方法:称取4.0g对苯溶于1000ml 0.01mol/L的PBS即可。
对苯醌对抗原具有较好的保护作用,但对超微结构的保存有一定影响,故常与醛类固定剂混合使用。一般要求临用前配制,且避免加热助溶,因加热或放置时间过长,固定液变为棕色至褐色,会使组织标本背景增加,影响观察。此外,对苯醌有剧毒,使用时避免吸入或与皮肤接触。
8.PFG液(Parabenzoqui-Formaldehyde-Glutaraldehyde fixative, PFG)
试剂:对苯醌            20g
多聚甲醛           15g
25%戊二醛           40ml
0.1mol/L二甲酸钠缓冲液   至1000ml
配制方法:先以500ml左右的二甲酸钠缓冲液溶解对苯醌及多聚甲醛,然后加入戊二醛,最后加入二甲酸钠缓冲液至1000ml充分混合。
对苯醌与戊二醛及甲醛联合应用,即可阻止醛基对抗原的损害,又不影响超微结构的保存,故适于多种类抗原的免疫细胞化学,尤其是免疫电镜的研究。

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